复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究

　　【论文摘要】该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与复方银杏叶颗粒（80，160，320，640 mg·L^-1）预孵育，合并使用H₂O₂（1 200 μmol·L^-1）建立氧化应激损伤模型。采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响，检测细胞培养上清中的LDH，MDA，NO含量及SOD活性，判断药物对内皮细胞的保护作用。通过Casepase-3活性检测以及AnnexinV-FITC/PI流式细胞术，检测药物对细胞凋亡的保护作用。使用 Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。研究发现1 200 μmol·L^-1H₂O₂能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤，使细胞存活率降低，且细胞增殖抑制程度与H₂O₂的作用时间呈正相关。而80，160，320，640 mg·L^-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤，恢复细胞正常增殖水平，改善细胞状态，抑制细胞凋亡，同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达。该实验证明了复方银杏叶颗粒对H₂O₂诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用，其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关。
　　【论文关键词】复方银杏叶颗粒；H₂O₂；HUVEC；内皮细胞损伤；细胞凋亡
　　[Abstract]To reveal the protective and anti-apoptosis effect of compound Ginkgo biloba granules on oxidative stress injury of human umbilical vein endothelial cells （HUVEC）. Negative control group， H₂O₂ model group and 4 drug pretreatment groups （80， 160， 320， 640 mg· L^-1） were established. The cell proliferation， morphological changes in each group after oxidative stress injury was detected by MTT assay and through microscope observation respectively. The content of LDH， MDA， SOD and NO and SOD activity in supernatant were detected to judge the protection effect of the drugs on endothelial cells. The protective effect on HUVEC apoptosis was analyzed by Caspase-3 activity test and Annexin V-FITC/PI staining. Western blot was used to observe the expression of apoptosis-related proteins Bcl-2 and Bax. Results showed that 1 200 μmol· L^-1H₂O₂ can induce oxidative stress injury in endothelial cells and reduce the cell survival rate； cell proliferation inhibition degree is positively correlated with the effect time of H₂O₂. Besides， 80， 160， 320 640 mg·L^-1compound Ginkgo biloba granules can protect HUVEC from oxidative stress injury， recover the normal proliferation level of cells， improve their state， prohibit cell apoptosis， and can up-regulate and down-regulate the expression level of Bcl-2 and Bax respectively. In conclusion， compound G. biloba granules can protect HUVEC from the oxidative stress injury induced by H₂O₂， its mechanism may be correlated with inhibition of the mitochondrial apoptotic pathway in HUVEC.
　　[Key words]compound Ginkgo biloba granules； H₂O₂； HUVEC； injury of endothelial cell； apoptosis
　　近20年来，我国四成以上的疾病死亡是由心脑血管疾病引起的，并且其发病率和死亡率仍在不断攀升。心脑血管疾病对国人的健康状况造成了巨大的威胁^[1]。所以，心脑血管疾病依然是所有疾病防治中的重中之重。心脑血管疾病的形成具有多种条件，动脉粥样硬化（As）则是其中一种重要的病理基础。而血管内皮细胞的损伤和功能障碍则被认为是As发病的早期关键环节^[2]。内皮细胞介导的内皮素（ET）和一氧化氮（NO）平衡失调以及一氧化氮合成障碍恰恰是产生内皮功能紊乱的主要原因^[3]。其中，血管内皮细胞是血液和血管壁之间的屏障，在各种生理过程中扮演着多种角色，包括选择性屏障、止血、凝血、抗凝、纤溶、血液流动和调节分泌各种血液相关因子等作用^[4]。当内皮细胞功能发生障碍时，极易引起相关心脑血管疾病。研究发现内皮细胞氧化应激损伤与细胞凋亡密切相关。本实验采取了H₂O₂诱导内皮细胞损伤模型，其是目前广泛应用的研究氧化损伤的实验方法。过量的H₂O₂能够诱导内皮细胞凋亡、促进单核细胞黏附、抑制NO生成等^[5]。

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