免疫分析法检测真菌毒素(2)

　　在玉米样品中添加适当浓度的黄曲霉毒素B1，呕吐毒素，或玉米赤霉烯酮，按照2.1的步骤进行前处理，之后按照2.2的步骤检测，每个样品检测4次，计算添加回收率与平均值。添加回收率的计算方法：添加回收率 = （样品检测浓度 – 空白样品检测浓度）/ 添加浓度×100%。
　　3 结果
　　3.1 标准曲线
　　黄曲霉毒素B1的ELISA标准曲线见图1。由图1可知，黄曲霉毒素B1的IC50为0.14 ng/mL。
　　呕吐毒素的ELISA标准曲线见图2。由图2可知，呕吐毒素的IC50为20.4 ng/mL。
　　玉米赤霉烯酮的ELISA标准曲线见图3。由图3可知，玉米赤霉烯酮的IC50为0.583 ng/mL。
　　3.2 添加回收率
　　玉米中黄曲霉毒素B1，呕吐毒素，或玉米赤霉烯酮的添加回收率见表1，由表1可知，在玉米中添加5 ng/g黄曲霉毒素B1，平均添加回收率为89.2%，添加500 ng/g呕吐毒素，平均添加回收率为94.8%，添加25 ng/g玉米赤霉烯酮，平均回收率为83.6%，结果的准确性较好。
　　4 讨论
　　本研究采用酶联免疫分析法检测黄曲霉毒素B1，呕吐毒素，或玉米赤霉烯酮，平均添加回收率在80%到100%之间，准确性较好，可以满足国家限量标准[4]。本研究为开发检测真菌毒素的蛋白质芯片及方法奠定了基础。
　　蛋白质芯片的技术原理是，将各种蛋白质有序地固定于芯片基底上，然后样品中标记了特定探针的生物分子与芯片作用，目标分子与固定蛋白质通过抗原-抗体相互作用等原理结合，经过漂洗将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用相应技术进行检测[6]。蛋白质芯片在医疗诊断[7]，食品安全 [8]，环境监测[9]等领域具有重要应用价值，有报道称蛋白质芯片可以用于真菌毒素的检测。李建林等人建立一种用光子晶体微球流式芯片检测真菌毒素的方法，可以同时检测黄曲霉毒素、伏马毒素和桔青霉毒素[10]。王莹等人建立了一种蛋白质芯片检测方法，可以检测黄曲霉毒素B1，黄曲霉毒素M1等六种真菌毒素[11]。王莹等人还建立了一种悬浮芯片检测方法，可以检测呕吐毒素，T2毒素等四种真菌毒素[12]。
　　本研究的下一步计划是建立蛋白质芯片检测真菌毒素的方法，在蛋白质芯片上包被多种真菌毒素的合成抗原，组成真菌毒素的检测位点阵列，在芯片上加入待测物，抗体与荧光标记探针，通过免疫反应形成抗原-抗体-荧光探针复合物，使用荧光检测器检测信号。该方法与传统的酶联免疫分析方法相比，通量更高，而且可以同时检测多种真菌毒素，可以极大的缩短检测时间。

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