从寄主范围来看,嫁接木本指示植物梨品种考密斯后,只有病毒分离物jf4和pv10在梨品种考密斯上显现出沿叶脉退绿症状,接种的其他不同分离物并未呈现明显症状。ASPV分离物pv9、pv13和jf1只侵染Spy227、杂种榅桲2种指示植物,不侵染光辉。其他的9个分离物的寄主范围相同,为杂种榅桲、Spy227和光辉。
不同分离物在不同指示植物上的症状较复杂,并未呈现明显规律性,因而单纯以生物学症状特点难以进行系统的ASPV株系分化分析。3种木本指示植物中,除个别分离物以外,光辉显现较为明显的病症时间普遍较晚,一般在6月下旬,和其他2种指示植物相比,大约晚1个月左右,且部分分离物不侵染光辉,较其他2种指示植物灵敏度弱。杂种榅桲较Spy227的症状反应种类更多,如叶片黄斑、退绿斑、舟形叶等,这种灵敏性更有利于区别同一病毒不同的株系。因此,杂种榅桲最适合做ASPV的指示植物,其次为Spy227,最后是光辉,这与王国平等[3,6]的报道基本一致。 当前研究中较多应用分子生物学方法对病毒进行鉴定及株系分化研究,如利用PCR技术扩增某特定基因并通过测序获得核苷酸序列信息之后可进行病毒系统进化分析。从遗传学理论上来看,基于病毒不同分离物基因组核苷酸序列信息能够反应不同分离物间的亲缘关系,但某一特定基因上一个碱基的改变就可能使病毒的表型发生变化;反之,几个碱基的变化也可能不引起任何表型上的改变[4]。因此,单纯以核苷酸序列信息来划分株系也存在一定不足,而病毒的寄主范围及引起的病症等生物学特征可弥补此不足,因而病毒的生物学鉴定当前仍具有重要理论及应用价值。 ASPV在寄主植物上多呈潜伏侵染,不引起明显症状[1],在受侵染的植株中病毒的浓度通常很低,因此进行生物学鉴定需要多种寄主植物同时检测。鉴定ASPV一般采用木本指示植物杂种榅桲、光辉、Spy227、梨品种考密斯和A20,同时结合草本指示植物西方烟37B进行[3,6],除A20外,本研究选用了上述指示植物对ASPV进行了鉴定。试验结果表明,苹果属指示植物杂种榅桲、光辉和Spy227均能灵敏地检测出ASPV,表现典型症状,而梨属指示植物梨品种考密斯,只有ASPV分离物jf4和pv10在其上显现出沿叶脉退绿,接种的其他不同ASPV分离物未呈现明显症状,提供的信息较少,因而尚需开发更有效的梨属指示植物。 王国平等[3]报道ASPV在梨品种考密斯上的早期表现为沿叶脉退绿,后期引起系统脉明症状。有研究表明脉明是一种光学幻觉(Optical illusion),烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)侵染烟草后,温度若在25 ℃以上则产生脉明,在40 ℃以下随温度升高脉明程度增强[4]。本研究并未观察到脉明症状,分析其原因可能在于脉明症状表现时间较短,在观察时很可能错过了脉明症状的表现时间,而未能观察到脉明症状。 参考文献: [1] JELKMANN W. Nucleotide sequences of apple stem pitting virus and of the coat protein gene of a similar virus from pear associated with vein yellows disease and their relationship with potex and carlaviruses[J]. Journal of General Virology, 1994, 75:1535-1542. [2] 刘福昌, 王焕玉. 苹果潜隐病毒(Latent virus)研究Ⅱ苹果品种和矮生砧木潜隐病毒鉴定[J]. 植物病理学报,1989,19(4):193-197. [3] 王国平,洪霓,张尊平,等.我国北方梨产区主要品种病毒种类的鉴定研究[J].中国果树,1994(2):1-4. [4] HULL R.马修斯植物病毒学(Matthews′Plant Virology)[M].范在丰, 李怀方,译. 北京:科学出版社,2007. [5] 侯义龙.果树主要病毒RT-PCR检测体系的建立、优化及病毒特异DNA片段克隆测序研究[D].沈阳:沈阳农业大学,2000. [6] 王国平,王焕玉,张尊平,等.几种木本指示植物对苹果潜隐病毒敏感性的研究[J].北方果树,1992(2):8-10.
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