用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g(±0.0020)6份置于锥形瓶中,加入60%的乙醇30mL,分别调整提取液pH值为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0在室温下分别浸泡提取30min抽滤,转移滤液至100mL容量瓶,用60%的乙醇定容至刻度线,用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中,按照1.3中方法测定其吸光度,得到提取剂提取液pH值对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势(见图5)。 由图5可知,提取液pH值在一定程度上影响竹叶中总黄酮类化合物的提取,但影响力度不大。实验中黄酮类化合物最高、最低提取率极差仅为1.010%,所以调整提取液pH值为7.5即可。 2.2 正交试验 以单因素实验为依据,为全面分析研究提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间、提取液pH值等因素对竹叶中黄酮类化合物提取的影响,选用在实验过程中提取率较高的范围进行L9(34)正交试验。结果见表1、表2、表3。 分析表2得出,对于醇提取竹叶中总黄酮类化合物的4个影响因素中,黄酮类化合物提取率影响力度大小:提取剂用量>提取剂浓度>浸泡时间>pH值。且醇提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物的最佳工艺为A3B3C1D2。即采用浓度80%的乙醇40mL,在提取液pH值为7.5的条件下室温提取浸泡30min,其提取率最高。 由于正交试验中没有包含该试验组,所以继续进行验证实验。在最佳工艺条件下,按照1.3中方法进行3组平行实验后,得到黄酮类化合物提取率8.664%,高于单因素实验中提取率最高值8.441%(2.1.1)。 3 实验结论 本实验设计了单因素实验和正交试验的方法,最终确定了醇提取竹叶中总黄酮类化合物的最佳条件,即用浓度为80%的乙醇提取剂40mL在提取液pH7.5的室温环境下提取浸泡30min,其黄酮类化合物提取率高达8.664%。其提取过程中的影响因素中,乙醇提取剂用量的影响力度最大,所以用适量的提取剂有助于提高黄酮类化合物的提取率。 参考文献 [1] 高志强,江相兰,宋仲容等.竹叶中黄酮类化合物的研究进展评述[J].西南民族大学学报(自然科学版),2005,31(1):38-43. [2] 杨兰,白勇.竹叶中黄酮类化合物的研究[J].食品研究与开发,2002,23(5):23-25. [3] 郑渊月.毛竹叶活性多糖、类黄酮的中试提取及分离纯化研究[D].南昌大学,2006. [4] 汤建萍,周春山,涂秋云等.微波辅助提取荔枝核黄酮类化合物及其抗氧化性研究[J].天然产物研究与开发,2007,19(4):671-674. [5] 郭雪峰,岳永德.黄酮类化合物的提取·分离纯化和含量测定方法的研究进展[J].安徽农业科学,2007,35(26):8083-8086. |