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醇提取秦巴山区竹叶中总黄酮工艺研究(2)

时间:2015-01-23 10:28 点击:
1.3 样液制备 将在秦巴山区采摘的竹叶清洗干净,放于干燥箱干燥,等完全干燥后取出进行粉碎,用100目标准检验筛筛选,取其样品干燥粉末。 准确称取样品干燥粉末1.0000g(0.0020)若干份,加入一定浓度的乙醇提取剂

  1.3 样液制备

  将在秦巴山区采摘的竹叶清洗干净,放于干燥箱干燥,等完全干燥后取出进行粉碎,用100目标准检验筛筛选,取其样品干燥粉末。

  准确称取样品干燥粉末1.0000g(±0.0020)若干份,加入一定浓度的乙醇提取剂若干毫升,调整提取液一定pH值,在室温下提取浸泡一定时间后抽滤,转移滤液于100mL容量瓶中,用一定浓度提取剂稀释、定容至刻度线,准确量取上清液1mL于50mL容量瓶中,分别加入配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL,摇匀放置6min,加质量分数10%的硝酸铝溶液1mL,摇匀放置6min,加质量分数5%的氢氧化钠溶液10mL,最后用一定浓度的乙醇若干毫升定容至刻度线,摇匀放置15min。以试剂空白为参比溶液,用1cm的玻璃比色皿在500nm处测量其吸光度3次,取平均值代入线性回归方程计算出总黄酮含量,并计算总黄酮提取率。

  1.4 样液中总黄酮含量提取率的测定

  式中:A-样液吸光度;V-样液体积;M-样品称取质量。

  2 结果与讨论

  2.1 单因素试验

  2.1.1 提取剂乙醇用量对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

  用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g(±0.0020)6份置于锥形瓶中,分别加入60%的乙醇10mL、15mL、20mL、25mL、30mL、40mL,调整pH值为7.0,在室温下浸泡提取30min抽滤,转移滤液至100mL容量瓶中,用60%的乙醇定容至刻度线,用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中,按照1.3中方法测定其吸光度,得到提取剂用量对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势(见图2)。

  由图2可知,提取剂乙醇用量在<30mL时对竹叶中黄酮类化合物提取率影响较大,当乙醇用量达到30mL时黄酮类化合物提取率达到最大值8.441%,在30mL之后影响逐渐减弱,在40mL时黄酮类化合物提取率反而下降,这可能是由于溶剂中有效成分浓度高,临界层浓度差小,原料的有效成分不利于扩散引起的。因此,对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂用量控制在20~40mL为好。

  2.1.2 提取剂浓度对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

  用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g(±0.0020)5份置于锥形瓶中,分别加入30mL浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇,调整pH值为7.0,在室温下浸泡提取30min抽滤,转移滤液至100mL容量瓶中,分别用对应浓度的乙醇定容至刻度线,用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中,按照1.3中方法测定其吸光度,得到提取剂浓度对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势(见图3)。

  由图3可知,竹叶中黄酮类化合物提取率随着提取剂浓度的增加而增加,在70%后影响逐渐变小,在浓度为80%的时候达到最大值8.208%。因此,从经济方面考虑,对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂浓度最好控制在60%~80%。

  2.1.3 提取浸泡时间对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

  用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g(±0.0020)5份置于锥形瓶中,加入60%的乙醇30mL并调整提取液pH值为7.0,在室温下分别浸泡提取10min、20min、30min、40min、50min抽滤,转移滤液至100mL容量瓶,用60%的乙醇定容至刻度线,用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中,按照1.3中方法测定其吸光度,得到提取剂提取浸泡时间对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势(见图4)。

  由图4可知,在一定时间内随着提取浸泡的时间的增加,竹叶中黄酮类化合物的提取率明显增加,但是随着时间的延长,提取率会有所下降。其中提取浸泡时间为40min时候达到最高值7.069%,在50min时提取率下降,这是提取剂中乙醇挥发,导致提取剂中有效成分减少的原因。所以,对竹叶中总黄酮类化合物提取的提取剂浸泡时间控制在30~50min为佳。

  2.1.4 提取液pH值对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

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